产品简介
转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。
建诺为生物最新研发的纳米聚合物转染试剂,是一种非常高效的基于高分子阳离子聚合物的新型转染试剂。可以与负电荷的外源基因有效结合,容易被细胞内吞,能显著提高外源基因的转染效率。由于采用新技术和新材料,具有高效、安全、低细胞毒性,同时兼顾操作方法简单、省时、经济等优点。根据长时间的实验验证,Trans-geneverTM转染每微克 DNA 用量少、效率高、重复性好,对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中,血清的存在不会影响转染效率,这样可以减少去除血清对细胞的损伤。同时,转染后不需要除去核酸-Trans-geneverTM复合物或更换新鲜培养基。
产品特点
产品规格
使用说明
1
第一天,将细胞接种到6孔板中,细胞接种数量约为 (3-5)x105 。
注:根据实验需求,可以选择不同的细胞培养装置,细胞接种数量和所需培养液体积详见附表1。
2
第二天,待细胞汇合度达到60%-70%,细胞存活率>90%,即可开始进行转染实验:
(1) 取2 μg质粒加入到1.5 mL离心管中,加入5 μL Trans-geneverTM转染试剂与质粒进行混合,室温孵育2 min;
注:一般质粒的量(μg)与Trans-geneverTM转染试剂剂量(μL)使用比例在1:2-1:4之间,质粒的量与转染试剂剂量的比例是因细胞而异的,最佳比例需根据目的细胞进行摸索和优化。293T细胞转染的推荐比例为1:2.5。
(2) 往核酸-Trans-geneverTM转染试剂复合物中加入400μL无血清DMEM基础培养基(无血清无双抗),吹打混合均匀,室温孵育30 min(室温存放4h内稳定);
注:MEM、1640、F12等基础培养基均可用于Trans-geneverTM转染试剂的溶剂,可根据目的细胞培养基进行相应变更。不同的细胞培养装置所需质粒的量和Trans-geneverTM转染试剂剂量详见附表2。
(3) 将400 μL 核酸-Trans-geneverTM转染试剂复合物均匀滴加到6孔细胞培养板孔中,轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布。
注:6孔板中为完全培养基,可提前更换为新鲜的完全培养基。轻轻晃动细胞培养板即可,切勿剧烈摇动细胞培养板,以免细胞脱落漂浮。细胞转染4-6h后,无需更换新鲜完全培养基。对于毒性特别敏感的细胞,也可在转染4-6h后,更换新鲜完全培养基。
3
细胞转染24-48h后,即可使用适当方式进行检测,如RT-PCR、Western blot、ELISA、流式细胞术、报告基因等。
附表1
常用细胞培养装置转染前一天细胞接种的推荐数量和培养体积
附表2
常用细胞培养装置细胞转染时,各组分推荐使用剂量(质粒细胞转染)
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