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【技术干货】咋回事儿?我纯化的蛋白被过滤膜“吞了“?

发布时间:2025-11-14作者:管理员 来源:本站 分类:技术专栏

 

# 背景 #

纯化蛋白过滤后产量减少主要由过滤过程中的蛋白质吸附损失、纯化步骤操作不当或蛋白稳定性问题导致。

📑过滤过程中的蛋白质吸附损失

研究表明,膜过滤步骤(如病毒过滤、超滤/透析过滤、最终除菌过滤)中蛋白质会因吸附在膜上导致损失。

滤器选型优化膜材选择可有效降低吸附,例如,实验室常见的PES(聚醚砜)膜材滤器对于某些蛋白低吸附的表现不够有优势,可以考虑改性的PES或PVDF膜材产品。

PES吸附蛋白的原理:

PES(聚醚砜)材料本身对蛋白的吸附作用较弱,但在特定条件下也可能发生非特异性吸附,其原理主要与以下因素相关:

🔍1.疏水相互作用

PES分子链中含有苯环等疏水基团,当蛋白溶液中存在疏水性较高的蛋白区域时,可能通过疏水作用与PES表面相互作用,导致蛋白吸附。例如,一些富含疏水氨基酸的蛋白片段可能更容易与PES表面结合。

🔍2. 静电相互作用

蛋白质在不同pH值下带有不同电荷,PES材料表面也可能存在一定的电荷分布。若蛋白与PES表面电荷相反,可能通过静电吸引发生吸附。但PES本身电荷密度较低,这种作用通常较弱。

🔍3. 空间位阻与构象变化

蛋白在溶液中具有特定构象,当接近PES表面时,可能因空间位阻或表面环境影响发生构象变化,暴露出原本隐藏的吸附位点,从而增加与PES的相互作用。

🔍4. 表面粗糙度与缺陷

PES膜表面的微观结构(如孔径、粗糙度)可能影响蛋白吸附。表面缺陷或不平整区域可能为蛋白提供额外的吸附位点,增加吸附概率。

 

为减少PES对蛋白的吸附,常通过添加亲水性改性剂(如聚乙二醇)或优化膜制备工艺,提高膜表面亲水性,降低非特异性吸附。

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