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破局基孔肯雅热!NEB双引擎:LAMP快检 + qPCR精筛

发布时间:2025-08-01作者:管理员 来源:本站 分类:技术专栏



近期,基孔肯雅热(Chikungunya fever)疫情在广东佛山等地引发关注,国家疾控局近日派出工作组赴佛山现场指导,国家疾控局相关负责人表示,广东省基孔肯雅热疫情仍处在高位平台期,疫情形势还相当严峻。


PART.01什么是基孔肯雅热?


图:白纹伊蚊

基孔肯雅病毒(CHIKV)是一种由伊蚊(身上有黑白花纹的“花蚊子”)传播的病毒,导致一种发热性疾病周期性且大规模爆发,其特征为严重且有时持续时间较长的多关节炎,CHIKV起源于非洲,第一例CHIKV于1952年坦桑尼亚被发现,由于感染者往往驼背且步态僵硬,这种疾病被命名为“基孔肯雅”。该词源自基马孔代语,意为“弯曲向上”。绝大多数感染者会发展为基孔肯雅热,这是一种急性疾病,其特征为发热迅速发作、导致行动不便的多关节炎和关节炎、皮疹、肌肉痛和头痛。基孔肯雅热的急性疾病症状与登革热相似,但与登革热不同的是,基孔肯雅热的一个显著特征是反复发作的肌肉骨骼疾病,主要影响外周关节,且在急性感染后可持续数月甚至数年。基孔肯雅热在全球热带和亚热带地区广泛流行,流行范围呈持续扩大趋势。我国媒介伊蚊分布广泛,且近年来境外输入病例不断增加,导致本地传播疫情风险日益升高。

图:急性&慢性CHIKV发病机制模型


PART.02病原学特征


CHIKV属于披膜病毒科甲病毒属,病毒颗粒呈球形,有包膜,直径60—70nm,只有1个血清型。病毒基因组为单股正链RNA,全长约11.8kb,内含单一可读框依次编码4种非结构蛋白和5种结构蛋白。根据病毒基因组遗传进化分析,可分为3个基因型,分别为西非型、东中南非型和亚洲型,其中东中南非型病毒突变形成的印度洋分枝(IOL)的病毒株,更易于经白纹伊蚊叮咬传播。

图:CHIKV病毒(图片来源:GeneTex)

基孔肯雅病毒对热敏感,56℃30分钟可灭活;不耐酸,70%乙醇、1%次氯酸钠、脂溶剂、过氧乙酸、甲醛、戊二醛、酚类、碘伏和季铵盐化合物等消毒剂及紫外照射可灭活。


PART.03辅助检测方法

一、分子检测技术(适用于发病后1-7天病毒血症期,以高灵敏度和特异性锁定病毒RNA)

(1) 实时荧光定量PCR(RT-qPCR):检测血液中CHIKV RNA,灵敏度达10–100拷贝/反应,耗时4-6小时

(2) 多重PCR技术:可同步检测基孔肯雅病毒、登革热(1–4型)

(3) 等温扩增技术(快速现场检测):恒温(37°C–65°C)下通过特殊酶实现核酸指数扩增,无需热循环仪。比如NEB WarmStart RT-LAMP Kit基于RT-LAMP技术,灵敏度达100拷贝/反应,耗时30-60min

(4) 宏基因组测序(mNGS/Deep-mNGS):无偏性覆盖、快速溯源、精准分型。一次测序覆盖所有虫媒病毒。

二、血清学检测(适用于发病5天后,检测免疫应答产生的抗体)

(1) IgM抗体(提示近期感染):发病4–8天出现,持续2–3个月(ELISA法,特异性>95%);

(2) IgG抗体(既往感染或恢复期):发病10天后出现,持续数年(双份血清滴度4倍升高可确诊既往感染)。

(该方法学与登革热、寨卡病毒存在交叉反应,需结合核酸或临床鉴别)

三、其它检测

(1) 血常规:白细胞正常或减少,血小板减少可能提示病毒感染,但无法区分病毒感染,也无法确诊基孔肯雅热

(2) 炎症指标:CRP、ESR显著升高提示关节症状严重度相关,但不能区分基孔肯雅热和其他炎性关节病

 

PART.04NEB 产品推荐


作为全球分子生物学核心酶试剂与技术的领导者,NEB (New England Biolabs) 致力于为 IVD 企业、疾控中心和科研机构提供源头、可靠的核心工具与技术方案,赋能从核酸检测、测序溯源到抗原抗体检测开发的全链条能力提升,共同守护公共健康!

NEB 提供 RT-qPCR 与 RT-LAMP 两大技术路径的完整解决方案,满足不同应用场景需求,助力 IVD 企业、疾控中心实现精准检测!

适用场景:IVD 企业开发/生产 CHIKV 核酸检测试剂盒;疾控中心实验室应急检测。

 

NEB|LAMP试剂盒助力检测:LAMP诊断原料的开拓者和实力担当!

NEB(New England Biolabs)公司开发出一系列用于 DNA/RNA 的 LAMP 试剂盒,让检测更简单、快捷。试剂盒均包含 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶,支持室温建立体系。以 RT-LAMP 为例,检测病毒的原理是通过恒温条件下高效扩增病毒RNA,实现快速、可视化的病原体检测。

原理解析

以下是分步原理详解:扩增过程(四步循环)

  • RNA逆转录(60–65°C):病毒RNA → 耐热逆转录酶 → 单链cDNA。

  • 茎环结构形成:引物F3/B3启动合成,FIP/BIP引物结合形成哑铃状DNA结构(扩增起点)。

  • 链置换扩增:Bst DNA聚合酶以茎环为模板,通过链置换活性循环扩增,产生多分支DNA网状结构。

  • 副产物累积显色:沉淀法:副产物焦磷酸镁(Mg₂P₂O₇)白色沉淀,肉眼可见浑浊;显色法:pH敏感染料(酚红)随副产物增加由粉红变黄

产品优势

  • WarmStart LAMP 变色预混液含有可视化的 pH 值变色指示剂,为 DNA 或 RNA 样品提供了快速、清晰、可视化的检测方案。

  • WarmStart 荧光 LAMP/RT-LAMP 试剂盒支持实时荧光检测。

  • WarmStart 通用 LAMP/RT LAMP 2X 预混液可兼容不同样品类型,适用于多种检测方法,包括:浊度检测、实时荧光检测和终点可视化检测

NEB|Luna qPCR & RT-qPCR 试剂盒助力检测:病毒 RNA 检测的理想选择

NEB Luna® 系列为优化的 qPCR 和 RT-qPCR 试剂产品,包含针对染料法和探针法的试剂。对于不同来源的样本,Luna 产品线都有良好的表现。荧光定量实时 PCR(qPCR)因其灵敏性和特异性成为核酸检测和定量的金标准。NEB Luna 产品针对 qPCR或 RT-qPCR 进行了优化,分别用于染料法或探针法检测。每一种基于热启动 Taq 聚合酶的 Luna qPCR 预混液均含有独特的参比染料,此染料可兼容一系列仪器。

原理解析

RT-qPCR可通过一步法或两步法来完成。一步法RT-qPCR把逆转录与PCR扩增结合在一起,使逆转录酶与DNA聚合酶在同一管内同样缓冲液条件下完成反应。一步法RT-qPCR只需要利用序列特异性引物。在两步法RT-qPCR中,逆转录和PCR扩增过程是在两个管中完成,使用不同的优化的缓冲液、反应条件、以及引物设计策略。

产品优势

  • 更简便:每个产品对应一种应用,方便的预混液形式及易操作的实验步骤

  • 性能优异:Luna 系列产品经过严格的优化及检测以确保特异性、灵敏度、精确性及可重复性

  • 防污染:预混液中包含 dUTP,qPCR 前使用 NEB 的南极热敏 UDG (NEB#M0372)进行预处理以防止产物残留污染。

  • 避免加样误差:试剂中含有肉眼可见的蓝色示踪染料,可避免加样错误,对荧光定量检测不产生任何干扰。

  • 双重热启动:温启动的反转录酶和热启动 Taq 酶共同提升了反应特异性和稳定性,支持室温建立体系。

 

产品推荐

 

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国家疾控-基孔肯雅热防控技术指南(2025版)

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