Cytiva作为生命科学领域的领xian企业,其蛋白质免疫印迹实验产品涵盖了从样品制备、电泳分离、转膜、免疫检测到结果分析的整个实验流程,今天重点给大家推荐几款热销产品。
蛋白免疫印迹
蛋白免疫印迹(Western Blot)是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
电泳
利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,在电场作用下,将生物样本中的蛋白质分子根据其分子量大小在凝胶上进行分离。SDS(十二烷基硫酸钠)是一种强阴离子表面活性剂,它能断开蛋白质分子内的氢键和破坏蛋白质分子的二级、三级结构,使其解聚成单链分子,并通过与SDS结合形成带负电荷的复合物,从而在电场中迁移。
Cytiva提供多种分子量范围的蛋白Marker,包括低分子量、高分子量和全分子量等,以满足不同实验的需求。预染彩虹Marker采用高强度、预先染色的技术,条带颜色鲜艳独特,便于在电泳过程中直接观察,无需额外的染色步骤。部分Marker如ECL™ DualVue Marker和ECL™ Plex荧光彩虹Marker,还结合了化学发光和荧光检测技术,提供了更高的灵敏度和分辨率。
转膜
将SDS-PAGE凝胶上分离的蛋白质通过电转移的方式转移到固相载体上,如NC膜或PVDF膜。固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,同时保持其电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
Cytiva的膜产品以其高结合载量、低背景和出色的信噪比而闻名。Cytiva的PVDF膜和NC膜(Amersham Protran系列)是Western Blot实验中常用的转印膜。其膜产品具有不同的孔径和结合特性,适用于不同分子量的蛋白质检测。
免疫反应
将膜上的蛋白质作为抗原,与特异性抗体进行免疫反应。之后,加入酶标二抗,与一抗结合的抗原-抗体复合物结合,形成抗原-抗体-二抗复合物。
显色检测
通过底物显色或荧光成像等手段,检测特异性目的基因表达的蛋白质。常用的显色方法包括放射自显影、底物化学发光(ECL)、底物荧光(ECF)和底物DAB呈色等。
Cytiva提供的ECL试剂,如Amersham ECL Prime和Amersham ECL Select,都具有极高的灵敏度。这些试剂通过优化增强剂和催化剂的配方,显著提高了信号强度和持续时间,使得即使在低丰度蛋白质的检测中也能获得清晰的信号。此外还具有稳定的信号输出特性,允许在同一次实验中多次曝光,便于处理多个印迹,降低了实验结果的变异性。Cytiva的ECL显色产品允许使用高稀释度的一抗和二抗,降低了实验的总成本。同时,高稀释度抗体的使用也有助于降低背景噪音,提高信噪比。
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