【干货】液相色谱常见问题与解决方法

高效液相色谱( HPLC) 是以液体作为流动相，利用样品各组分在流动相和固定相中分配系数或吸附系数的差异来实现不同组分分离的色谱分析技术。该技术具有实用、快速、灵敏、效率高等特点， 在医药、环保、石化、生命科学、食品工业等领域有着广泛的应用。然而，在HPLC实验过程中常会出现各种各样的问题，今天小编就给大家分享一下液相色谱分析常见的问题与相应的解决方案。

1.保留时间漂移

关于漂移问题：

• 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定；

• 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等；

• 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定；

• 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出；

• 流动相不合适，解决办法为改换流动相。

保留时间漂移

Fisher chemical溶剂一直是赛默飞化学品中的热卖产品，覆盖了实验室分析检测的主要项目。

• 亚微米级过滤：杂质含量低

• 高纯度：背景噪音低

• 稳定性：良好批次稳定性和数据重现性

• 惰性气体填充：水分含量低

2.色谱柱柱压过高

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，可以按如下步骤进行检查。

• 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查第二步；

• 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查第三步；

• 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。

• 更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。

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3.色谱峰出现拖尾或出现双峰

筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子；

• 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子；

• 色谱柱柱超载，减少进样量。

拖尾峰

4.结果重现性差

尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的C18柱填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。

5.梯度洗脱中柱温的变化

许多色谱工作者在操作液相色谱时，色谱柱是在室温环境下工作的。如果实验室的温度能保持不变的话，不会有什么大问题。但大多数的工作环境温度是不断变化的，因此若想将在某实验室开发的一种液相色谱方法应用到其他实验室的话，温度的差别就会引起较复杂的问题。

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