细胞转染对初接触细胞实验的科研人员而言,是一道难过的坎儿,细胞转染率低的话,你珍贵的细胞可能就只能扔掉了。
细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。
当然,关于基因片段转移的方法还有很多,像转化,转导,感染等,为了避免混淆,更好地区分这些概念,我们做了一个小总结。
表 基因片段转移方法总结汇总
言归正传,还是要说到我们今天的主角——细胞转染
转染分类
利用哺乳动物细胞表达系统生产蛋白通常有两种方式:瞬时转染与稳定转染。
下面,一图一表让你搞清楚两者的区别:
图 瞬时转染与稳定转染原理对比
表 瞬时转染与稳定转染优缺点对比
转染方法
理想的细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。目前实验室常用的有物理/化学/生物等相关方法,不同的转染方法各有利弊,针对细胞的习性和不同的实验目的选择相对合适的转染方法。下面列举了一些常用转染方法的原理,优缺点和适用性:
表 转染方法分类及优缺点
图 化学转染方法
化学转染法是生物医学研究中最常用的转染方法,主要包括两类:阳离子脂质体和阳离子聚合物。其基本原理是利用阳离子的化学分子与带有负电荷的核酸通过正负电荷作用形成稳定的带上正电荷的复合物,而多数细胞膜表面带有弱的负电荷,通过电荷作用吸引复合体到细胞膜表面;化学试剂还能对线性的核酸进行浓缩,使其体积变小更易穿透细胞膜。
赛默飞旗下的Lipo系列转染试剂是阳离子脂质体类的代表,毫不夸张的说,凡是做转染实验的科研汪肯定都听过Lipo的大名。
从最开始的Lipo2000到现在的Lipo3000等系列产品,可以说一直以来都是这个领域里的扛把子产品。
建诺为生物最新研发的纳米聚合物转染试剂,是一种非常高效的基于高分子阳离子聚合物的新型转染试剂。可以与负电荷的外源基因有效结合,容易被细胞内吞,能显著提高外源基因的转染效率。
图 建诺为生物--转染试剂
生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体,以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等最常见,其侵染效率可以达到90%以上,但常因安全性等问题,很多实验室对其敬而远之。
图 生物转染--慢病毒
注:建诺为生物转染试剂已将上市,欢迎咨询
对于细胞转染实验,转染试剂、转染方法、细胞状态等都会影响到细胞转染的效率。本文也只是简略介绍转染的一些基本常识,有兴趣的朋友还请持续关注我们的公众号,再分享后续转染相关的知识后还会分享更多的基本的原理及常用的试剂耗材,让我们的实验能够事半功倍。
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