Matrigel使用常见问题-FAQ

Matrigel是来源于EHS小鼠肉瘤的基底膜基质，其中含有约60%层粘连蛋白、30% IV 胶原和8%的巢蛋白，还含有基底膜聚糖、TGF-ß、表皮生长因子、类胰岛素生长因子、组织纤溶酶原及其他生长因子。

康宁Matrigel主要有常规标准型（Standard）、高浓度（HC）、无酚红（Phenol red-free）、生长因子减量型（Growth factor reduced, GFR）和人胚胎干细胞专用（hESC-qualified）几个类别。

• 标准型Matrigel：浓度范围大致为8-12mg/ml

• 高浓度Matrigel：浓度范围大致为18-22mg/ml

• 无酚红Matrigel：不含酚红，产品完全融化后颜色透明

• 生长因子减量型Matrigel：Matrigel里包含的生长因子经过减量处理

• 人胚胎干细胞专用Matrigel：经过对hESC培养的测试，可以用于人胚胎干细胞的培养。

首先确认是否由干冰运输，到货时包装箱中干冰是否足量，查看Matrigel液面是否基本水平，以及瓶身侧壁、瓶口有无Matrigel融化的痕迹，以确保运输质量；若发现问题，请及时拍照记录，并联系区域销售反馈。

收到产品并确认到货情况无异常后，请将Matrigel储存于-20℃冰箱，长期保存可置于-80℃冰箱。切勿将Matrigel储存于自动除霜的冰箱中。在第一次融化后请分装保存，应避免Matrigel反复冻融。

无酚红Matrigel没有颜色，完全融化后应是透明的；

含酚红Matrigel颜色可以在明黄色至暗红色之间变化，这些颜色变化是正常现象。因为酚红存在时，在温度、pH不同的情况下液体会出现颜色的差异。

将整瓶Matrigel埋没在碎冰盒中，再将冰盒置于4℃冰箱中，建议放在冰箱靠后的位置，放置过夜融化。确保碎冰足量。融化后转动瓶子查看Matrigel是否全部融化，确认无冰晶或胶块残留。我们建议过夜融化，高蛋白浓度的Matrigel可能需要更多的时间。请勿将Matrigel瓶直接放在4℃冰箱中融化，也请勿将冰盒及Matrigel放置在冰箱门上或冰箱靠门的位置。

标准型Matrigel融化后应为澄清的液体，无酚红的为澄清且透明；蛋白浓度越高，融化后液体越粘稠。具体请参考下图Matrigel融化后的照片，左边两瓶是高浓度型，右边两瓶是标准型。其中高浓度比较难以用肉眼判断是否融化，可以用预冷枪头吹打判断是否融化为粘稠液体。

建议根据您一次的使用量做小量分装。请注意与Matrigel接触的所有耗材如枪头、管子均需事先预冷，且在冰上无菌操作。分装后的Matrigel可保存在-20℃或-80℃冰箱。建议保留瓶子的标签或记录下货号（Catalog Number）及批次号（LOT number），以便后续查询追踪相关信息。 

Matrigel对温度非常敏感，超过10℃即开始成胶，超过22℃成胶速度会更快。如果到货情况正常，出现此种现象应该是融化操作不规范或者融化期间环境温度升高导致部分凝胶。请一定严格按照融化操作规范执行，确保融化时保持低温环境。

一般可用预冷的无血清培养基或pH7.4的PBS稀释。由于批次之间的浓度差异，除354277外，推荐按照特定的工作终浓度稀释，而不要以比例或稀释倍数稀释。

可以在康宁官网，输入货号，选择quality certificate按钮。或直接点击网址：https://www.corning.com/asean/en/products/life-sciences/resource-library.html进入质检证书查询页面，输入货号与批号，点击查找，获得相应COA文件。该文件中有蛋白浓度的说明；

对于干细胞专用型Matrigel，COA中不包含浓度说明，仅以稀释系数为实验参照，如需了解具体浓度信息，请联系康宁技术支持。 

• 凝胶浓度：在需要Matrigel凝胶的实验中，工作浓度需大于3 mg/mL

• 包被浓度：包被实验时Matrigel无需成胶，因此包被浓度应小于凝胶浓度（即3mg/mL）

• 工作浓度需要根据具体的细胞类型进行预实验测试。对于侵袭实验，建议初始浓度设置在200-300 μg/mL之间，再根据特定的实验体系进行优化

• 血管生成实验浓度：请务必使用大于10 mg/mL的Matrigel产品，康宁提供挑选批次和批次预留的服务，请您在订购产品时向代理商说明您的要求

• 体内皮下注射实验浓度：由于是体内实验，为了避免成胶不完全，建议终浓度在4 mg/mL以上 

对于干细胞专用型Matrigel，其COA中不包含浓度说明，但是有稀释因子说明。稀释因子的数值也是批次特异性的，每个批次的稀释因子是根据蛋白质浓度计算的。可以按照稀释因子的数值来确定使用的量。比如某一批次的稀释因子为238 μL，则可将238 μL的hESC-qualified Matrigel原液加入到25ml DMEM/F12中，混匀后可铺4块六孔板，每孔使用1ml Matrigel稀释液进行包被。具体实验步骤可见相应COA文件。

所有接触Matrigel的试剂耗材产品都需要预冷，操作过程应全程在冰上操作，确保低温环境。Matrigel对温度十分敏感，一旦超过10℃，即开始凝胶。

包被指Matrigel浓度小于成胶浓度（即<3 mg/mL），在细胞培养器皿表面形成薄薄的蛋白层而不凝成胶冻状物质；凝胶指Matrigel浓度大于等于成胶浓度（即≥3 mg/mL），在细胞培养器皿表面能够形成胶冻状物质。

薄胶（Thin Gel）：50μL/cm2，常应用于细胞附着和增殖；厚胶（Thick Gel）：150-200 μL/cm2，常应用于3D细胞培养；各培养器皿的有效培养面积请参考下表：

包被过的培养器皿最好当天使用，具体情况取决于实验目的。在需要保存的情况下，Matrigel包被之后的培养器皿可以于37 ℃恒温箱或4 ℃冰箱中放置最长一周的时间。保存时培养表面需要保持湿润，请勿将包被工作液从培养器皿中吸出。（稀释后未用完的Matrigel不建议保留再用）。

Matrigel一旦成胶，是很难完全恢复的。可以尝试将Matrigel埋在碎冰中，放入4℃冰箱，24-48小时后观察能否融化。请注意，对于该处理方式后融化的Matrigel，其性能是无法保证的。

推荐使用康宁Dispase或Cell Recovery Solution 产品。Corning Dispase 相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液，不会损伤细胞或细胞表面蛋白。此外，Corning Dispase还可用于组织分离。对于代谢研究和RNA抽提，建议在4℃使用Corning Cell Recovery Solution进行非酶反应的细胞收获，因为Corning Matrigel中含有痕量的RNA，进行RNA分析时，应设置仅含有Matrigel（不接种细胞）的阴性对照组。

在侵袭实验中，使用Matrigel的目的是包被小室表面，形成一层基质蛋白薄膜来模拟细胞外基质，其使用浓度小于3mg/ml，没有达到成胶浓度，是不会成胶的。