色谱柱活化、清洗到底需要多久？—常规 C18 色谱柱操作指南

柱体积计算方式如下：

l——柱长；

d——内径； 

ε——空隙率（流动相自由通过的空隙体积，占色谱柱总空柱体积的比例）；常规色谱柱的值在0.6-0.7，通常取0.65。

推荐冲洗量：

活化：核心目的为唤醒新柱填料的活性，同时可去除部分生产杂质。新柱出厂会用保存液封存，填料键合相还处于 “休眠状态”，活化能让填料充分舒展，以此实现组分的稳定保留，以及实验结果的重现，通常活化15-20倍柱体积。

平衡：核心目的为使系统运行状态为方法初始状态，以确保进样过程重复性稳定，通常平衡10-30倍柱体积，建议根据实际基线情况判断。（部分方法需不中断运行的，应连续进样空白进行平衡维持初始状态）

清洗：核心目的为除盐、除难洗脱物，以防止色谱柱堵塞，柱效降低，通常清洗10-20倍柱体积，可根据污染程度适当调整时间。

保存：长期保存需彻底置换主内溶液，置换15-20倍柱体积。

溶剂切换过渡：核心作用为提供过渡，避免不互溶体系直接接触堵塞色谱柱，通常10-15倍柱体积即可。

流速：活化可使用较低流速，让碳链缓慢舒展稳定。HPLC系统，如方法压力较小，其他用途可使用方法流速直接进行，如反冲or系统压力较高，通常取用低流速（eg:0.1ml/min、0.2ml/min）冲洗；UPLC系统，为避免填料高压塌陷，通常逐步提高流速，平缓过渡。

（不同厂家产品略有差异，可参考对应说明书，并根据实验目的进行时间调整）

Tips: 通常情况下，冲洗体积达到15倍柱体积时，柱内溶液残留率约0.25%，可视为完全置换。（亦需视情况而定，例如反向系统冲为正向系统所需时间通常更久）

 *含AI生成图片。

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