免疫实验选型指南｜告别名词混淆，少走90%弯路

其实这四项技术的核心逻辑一致，均基于「抗原抗体特异性结合」，差异主要体现在「样本类型」「信号检测方式」和「标数能力」，分清这三点就不会乱。

根据样本类型分为两类：

✅ 信号检测：荧光素标记抗体（常见绿/红/蓝三色），需荧光显微镜或激光共聚焦

✅ 核心用途：单/双标共定位分析、抗原精准定量（无内源性酶干扰）

优势：背景低、定位准，支持多标组合；

局限：荧光易淬灭，全程需避光，封片后24h内必须完成成像。

✅ 适用样本：贴壁细胞爬片、悬浮细胞滴片（如肿瘤细胞系、原代细胞）

✅ 常用体系：优先搭配IF荧光体系（背景干净、定位精准），极少用显色体系

✅ 核心用途：蛋白亚细胞定位（胞核/胞质/细胞膜）、细胞水平机制验证

优势：样本制备简单、易重复，新手友好度极高；

局限：无组织空间结构，无法反映体内微环境状态。

✅ 核心技术：酪胺信号放大技术（TSA），可放大弱表达抗原信号，避免多标串色；

✅ 适用样本：石蜡/冰冻组织切片（石蜡切片适配性更强）；

✅ 核心用途：肿瘤微环境分析、多蛋白互作研究、免疫细胞浸润定位；

优势：一次实验获取多维度数据，节省珍贵临床样本，减少样本间误差；

局限：成本高、操作流程复杂，对抗体组合和设备要求较高，适合有基础后尝试。

荧光类实验（免疫荧光IF/组织荧光IHC-IF/多重免疫组化mIHC）

从二抗孵育开始必须「全程避光」，封片时一定要用抗淬灭封片液，否则荧光信号会快速淬灭，甚至无法成像

抗原修复（免疫组化IHC/多重免疫组化mIHC关键步骤）

 石蜡切片高温修复后，务必「自然冷却至室温」，严禁用水冷！否则抗原表位会重新折叠，直接导致实验无阳性信号

免疫细胞化学（ICC）细胞爬片操作

爬片必须用多聚赖氨酸包被（防脱片），洗涤时沿培养孔壁缓慢加液，切勿晃动培养板，否则细胞会大面积脱落，实验直接作废

多重免疫组化（mIHC）多标抗体组合 

一抗优先选择「兔/鼠/山羊」不同种属来源，避免二抗交叉反应；荧光素选光谱无重叠组合，减少串色