技术干货】一文读懂瞬转 vs 稳转的“双雄争霸”

瞬时转染：将外源DNA/RNA导入细胞后，这些遗传物质不整合到宿主细胞的基因组中。它们以游离的形式存在，随着细胞的分裂而逐渐被稀释、降解。

稳定转染：通过特定方法（如病毒整合或非同源末端连接），使外源DNA整合到宿主细胞的基因组中，或形成能在细胞分裂中长期稳定存在的染色体外附加体。

瞬时转染：

• 快速功能验证：验证某个基因过表达或干扰后的短期表型。

• 报告基因实验：检测启动子活性、信号通路调控（如荧光素酶实验）。

• 蛋白质小规模生产：在HEK293T等细胞中快速生产重组蛋白或病毒载体。

• CRISPR/Cas9基因编辑：将Cas9蛋白和gRNA瞬时导入细胞，进行基因敲除。

稳定转染：

• 建立稳定细胞系：用于长期研究基因功能（如致癌基因、耐药基因）。

• 蛋白质大规模生产：用于生物制药，生产治疗性抗体、激素等。

• 长期药物筛选：构建对特定药物敏感或耐药的细胞系，用于高通量筛选。

•  基因治疗研究：模拟基因在体内长期表达的效果。

细胞瞬转表达的抗体确实可能产生较多杂质，主要因为瞬转表达水平高、速度快，易导致错误折叠或组装的副产物。

主要杂质类型

•产物相关杂质：包括重链同二聚体、轻链错配产物、半抗体、3/4抗体及聚集体等；

•工艺相关杂质：宿主细胞蛋白(HCPs)、宿主细胞核酸(HCD)、培养基成分及脱落的配基等。

杂质产生原因

•瞬转表达量高、速度快，细胞折叠和组装能力超负荷，导致错误折叠或不完全组装的抗体增多；

•表达系统特性：如CHO细胞瞬转时凸起/孔洞重链共同表达，易形成同二聚体杂质。

杂质去除策略

可通过亲和力差异、电荷性等差异分离纯化

先瞬转，后稳转：在研究初期，通常先用瞬转验证基因的功能和表型。确认有效后，再投入时间和资源构建稳转细胞系进行深入机制研究。

根据目的决定：

• 如果是 “看一看”、“快筛” → 选短跑选手瞬转。

• 如果是 “长期用”、“深入研” → 选马拉松选手稳转。

考虑细胞类型：有些难转染的细胞（如原代细胞、神经元），可能只适合瞬转或必须使用病毒载体才能实现稳转。

简单来说，瞬转像是“短期租房”，快速方便但无法长久；稳转则是“买房落户”，过程繁琐但能一劳永逸地获得稳定的资产。根据你的实验目标和时间安排，选择最合适的技术路径。

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