产品推荐 | 人 α-突触核蛋白检测试剂盒 ，助力神经退行性疾病早诊早治

 α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)的错误折叠及其在细胞间的传播起关键作用。 体内的异常生理环境可诱导α-Syn的错误折叠或过度磷酸化,使其形成寡聚体或不溶性的原纤维,并异常沉积在神经元或胶质细胞中,从而引发多种神经退行性疾病,包括帕金森氏病(Parkinsons disease, PD)、路易体痴呆(dementia with Lewy body,DLB)和多系统萎缩(multiple systematrophy,MSA)^[1]。

在中枢神经系统中,α-Syn高表达在神经元的突触前结构,参与突触囊泡的运输、神经递质的释放和回收、线粒体呼吸、轴突运输等重要生理活动。 除了脑组织,α-Syn还少量表达在肌肉、红细胞、淋巴细胞等外周组织和细胞^[2]。

产品推荐：Revvity  |  HTRF Human Total α-Synuclein Detection Kit

人总α-突触核蛋白细胞检测法用于监测磷酸化和非磷酸化的α-突触核蛋白的表达水平。该检测法能够从单个样本中分析磷酸化和总α-突触核蛋白，从而更好地理解α-突触核蛋白介导的病理发生机制。

工作原理 

总α-突触核蛋白检测试剂盒可以定量细胞裂解液中α-突触核蛋白的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板，无需凝胶、电泳或转膜步骤。

试剂盒采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团，两种抗体均对目标蛋白上的不同表位具有高特异性。当细胞提取物中存在α-突触核蛋白时，加入这些偶联抗体后，供体荧光团与受体荧光团会近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样本中目标蛋白浓度直接相关，可通过无洗涤检测模式评估蛋白表达水平。

双板检测方案流程：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解液转移至 384 孔低体积检测板，再加入总α-突触核蛋白 HTRF 检测试剂。该方案可监测细胞活力和汇合度。

使用 HTRF 试剂检测总α-突触核蛋白时，可在同一培养板中完成细胞培养、刺激和裂解操作，无需洗涤步骤。该方案专为高通量筛选（HTS）设计，可实现微型化检测，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

HTRF检测结果显示，HELA细胞中的α-突触核蛋白水平高于SH-SY5Y细胞，并且，HTRF总α-突触核蛋白检测试剂盒不会检测到β-突触核蛋白。

实验流程：

1) 将HELA细胞和SH-SY5Y细胞接种后，在 37℃、5% CO₂条件下培养至汇合状态；

2) 细胞裂解后，将裂解液进行系列稀释；

3) 采用 BCA 试剂定量总蛋白含量，同时使用HTRF总α-突触核蛋白细胞检测试剂盒定量α-突触核蛋白。

帕金森病通路与α-突触核蛋白的作用：α-突触核蛋白是突触核蛋白病患者大脑中细胞内纤维聚集物的主要成分，是帕金森病、路易体痴呆或多系统萎缩的关键分子标志物。α-突触核蛋白在 Ser129位点的广泛磷酸化也与病理进程相关。