技术干货 | 一文通关，ELISA样本前处理详解（含FAQ）

血液样本是ELISA检测中最常见的样本类型，根据处理方式不同分为血清和血浆两类：

• 血清样本制备

将全血室温放置20-30min，使其充分凝固

4℃ 1000×g离心10min，仔细收集上清

注意事项：如不能在24小时内检测，建议将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

• 血浆样本制备

用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本

标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min，取上清即血浆

如不能在24小时内检测，建议将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融

注意事项：常用的抗凝剂有EDTA、肝素或柠檬酸盐，采集样本前应仔细阅读说明书，检查试剂盒是否对抗凝剂 有特殊要求。

将细胞培养上清液吸入离心管中，在4℃条件下，以1000×g离心20 min，除去细胞碎片和杂质，取上清，即可检测。

① 用冷的PBS轻轻清洗贴壁细胞，使用胰蛋白酶消化，1000×g离心5 min后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集；

② 将收集到的细胞用冷的PBS洗涤3次。加入PBS或者细胞裂解液，并通过反复冻融或超声使细胞破碎；

③ 将提取液于4°C，10000×g离心10 min，取上清检测。

① 用预冷的PBS（0.01 M，pH 7.4）冲洗组织，除去表面残留的血液或杂质；

② 将组织块称重，再切成尽可能小的碎块，以便充分匀浆；

③ 加入适量的预冷PBS或者组织裂解液，用玻璃匀浆器在冰上或冰浴中充分匀浆。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融；

④ 将匀浆液吸入离心管中，4°C条件下，以5000×g离心5-10 min，取上清检测。

A: 样本收集是第一步，也是确保结果准确性的基础，需特别注意以下两点：

• 避免溶血：采集血液样本时应尽可能避免发生溶血。红细胞破裂释放的内容物可能会干扰后续的抗原抗体反应，导致检测值不准。

• 慎用高血脂样本：高血脂样本会影响溶液的均一性，并可能干扰抗原与抗体的结合过程，导致测值准确性降低，应尽量避免使用。

A: 正确的保存方式对维持样本中待测物的稳定性至关重要。

• 短期保存：若样本在采集后1周内进行检测，可存放于4℃的冰箱中。

• 长期保存：若无法及时检测，请将样本按一次实验用量进行分装，并冻存于-20℃或-80℃环境中。务必避免反复冻融样本，以免蛋白降解影响结果。

检测前处理：实验前，建议将冻存的样本再次离心，取上清检测，以除去可能产生的沉淀物或杂质。

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