样品溶剂对色谱峰形有什么影响？

高效液相色谱是药物分析中最常用的定性和定量分析手段。在分析的过程中，通常需要进行流动相优化和色谱柱筛选以获得良好的峰形和较高的分离度，在这个过程中经常会忽略样品溶剂对色谱峰形的影响。如果溶样溶剂选择不合适容易造成 “溶剂效应”，即溶样溶剂与流动相比例存在差异时会导致色谱保留行为异常。今天小编就给大家分享一些关于色谱分析中溶剂效应的知识和怎样避免溶剂效应的方法。

自动进样器注入的样品通过管路到达分离柱。如果在样品溶剂到达柱之前样品溶剂和流动相的混合不充分，根据样品溶剂的类型，峰形可能会恶化。当使用洗脱强度高于流动相的样品溶剂时，峰形可能会变宽。此外，使用内径较小的管路的 UHPLC 系统容易受到样品溶剂和流动相混合不充分的影响。

图 1 以反相色谱法分析咖啡yin时的理论塔板数为例，样品溶剂的洗脱强度对峰形的影响。峰形参数用理论塔板数表示 (TPN)，它表示峰值的锐度。在这种情况下，甲醇/水 (3:7) 的混合物用作流动相。比较使用甲醇作为样品溶剂（洗脱强度高于流动相）和水（洗脱强度较低）时的 TPN，可以看出 TPN 存在差异。当进样量进一步增加时，可以看到明显的差异。 

图2 甲醇作为样品溶剂时进样量和峰形的比较。调整样品浓度，使绝对进样量相同。随着进样量的增加，峰形变差。

当溶样溶剂强度大于流动相强度，一部分样品溶解于溶剂中会被迅速洗脱出色谱柱，而一部分样品溶解于流动相，被流动相洗脱出，在经过检测器，形成色谱峰的展宽或者分叉，同一目标物给出了两个色谱峰，其中进柱前即扩散进入流动相的那部分目标物组成了后面的色谱峰，它的保留时间与目标物的真实保留时间基本吻合，处于溶剂范围的那部分目标物保留时间提前，样品在柱前的不充分扩散导致了峰前沿，严重会出现峰穿透现象，降低柱效，影响分离度。相反，而当溶样溶剂强度小于流动相强度，则保留时间延后，但延后幅度较小，即使发生裂分，前后两峰均能保持良好峰形。针对溶剂强度造成溶剂效应的现象，结合上述案例可以尝试采取以下的消除办法: 在不影响目标物溶解性的情况下，尽量用流动相或者与流动相接近的溶剂作为样品溶剂; 为了满足多目标物的提取或溶解度，必须使用强洗脱溶剂时，比如天然产物分析，在不影响灵敏度的情况下降低进样体积; 如果无法更改溶剂强度或者降低进样体积，可以采用梯度洗脱模式，降低起始流动相比例避免溶剂效应，因为初始比例流动相无法洗脱目标物，而且强洗脱溶剂也无法让目标物快速移动，它们会富集在柱头，等流动相洗脱强度提高到一定程度，化合物才会逐渐被洗脱; 另外反相条件可以尝试 HILIC 色谱柱，该色谱柱使用的溶剂系统的顺序为乙jing( 最弱) ＜甲醇＜水，与反相色谱系统中溶剂强度的顺序刚好相反，反相强溶样溶剂与 HILIC 色谱柱流动相比例接近或稍弱，不会引起溶剂效应。

图3 分析物和样品溶剂穿过色谱柱的图像。使用具有更高洗脱强度的样品溶剂可以更快地移动分析物。使用洗脱强度低于流动相的样品溶剂可以抑制分析物在色谱柱中的扩散，使峰形变锐利。

在使用高效液相色谱定性定量过程中，选择使用流动相或者是与流动相相接近的溶剂溶解样品可以避免溶剂效应，确保峰形良好，从而实现测定结果的准确性和重现性。

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