今天，你核酸了吗？

今天，你核酸了吗？

对于核酸提取的知识你又了解多少？今天小编就给大家分享一些在核酸提取的知识和提取过程中常见的误区。 

核酸是储存、复制和传递遗传信息的主要物质，主要有DNA和RNA，而核酸提取是分子生物学应用中最基本的步骤之一，是许多实验的先决条件。提取的核酸质量将直接影响后续实验检测的结果。

二、核酸提取的基本步骤

图1 核酸分离纯化示意图

2.1裂解细胞，释放核酸。

使用裂解液破坏样品细胞结构，从而使样品中的DNA游离在裂解体系中；

2.2核酸的分离与纯化。

需要将与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子和其他不需要的核酸分子去除；

2.3核酸的浓缩、沉淀

2.4纯化核酸。

纯化则是使DNA与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。

三、核酸提取纯化的方法

表1 几种核酸提取纯化方法比较

3.1 酚lv仿抽法：此法是DNA提取的经典方法，主要是使用两种不同的有机溶剂交替抽提将蛋白去除。用ben酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA的联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与ben酚相似相溶，同时ben酚抑制了DNase的降解作用，蛋白质分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。离心后，DNA可取出。

3.2 异硫氰酸胍/ben酚法（Trizol法）：Trizol法是提取RNA的经典方法，在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时又能破坏细胞及溶解细胞成分。加入lv仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

3.3离心柱法：通过特殊硅基质吸附材料，能够特定吸附DNA，而RNA和蛋白质顺利通过，然后利用高盐低PH结合核酸，低盐高PH值洗脱，来分离纯化核酸。离心柱纯化也是试剂盒提取中广泛的使用方法。

3.4磁珠法提取：磁珠法不需要离心、无需加入多种试剂，操作简单，符合核酸自动化提取要求。但是成本较高，科研端使用很难普及。

四、核酸提取常见的误区

误区一：试剂用量越多，提取效果越好

裂解效果差？添加更多的裂解物。洗涤效果差？添加更多的洗涤溶液。这是很多客户使用套件的惯性。以核酸提取中磁珠法为例，虽然加入裂解缓冲液和洗涤缓冲液确实可以增强裂解，增强洗涤效果，但是每增加一次溶液的体积，都会降低磁珠碰撞的概率，从而导致吸附效率大幅度下降。所以在实际操作中，单纯地增加试剂用量来提高萃取效果不一定完全有效。

误区二：洗涤次数越多，萃取效果越好

当提取的核酸中杂质过多时，用户会考虑进行更多的洗涤以获得更纯的核酸。增加洗涤次数确实有利于核酸的纯化，但一般每次洗涤都会损失一定量的核酸，同时也增加了核酸片段化和水解的可能性。因此，洗涤次数应控制在2～4次。

误区三：添加的样本越多，提取效果越好

当样本不够新鲜或核酸本身含量很少时，往往会导致核酸提取效果不佳。这时候很多人会通过添加样本来增加核酸提取量。但简单地增加样本量有时会引入过多的杂质。此外，超过裂解缓冲液的裂解能力也会降低提取效率，因此不建议通过简单地增加样本量来增加提取量。但如果由于样品量不足导致提取量过低，需要在预处理过程中，先进行富集或者浓缩来增加样品浓度。另外通过增加裂解强度来分离更多地核酸也是一种替代方法。

工欲善其事，必先利其器。想必核酸提取的流程大家已经熟悉，下面给大家介绍核酸提取过程中必备的一款Thermo Scientific™ 生物安全柜 (BSC)。

Thermo Scientific™ 生物安全柜 (BSC)

数字化气流验证 (DAVe) 可为超出规格的任何情况发出报警信号以提升保障

 另外，在核酸的提取和检测过程中，根据需要加入适当的核酸提取剂也同样重要， 我们公司目前提供各种类型的核酸提取试剂，欢迎您来抢购！

常卖货号