【干货】细胞不贴壁的原因及解决

1、细胞为什么要贴壁

首先并不是所有的细胞在体外培养的情况下都会贴壁，但大部分来自实体组织器官的细胞都会贴壁。

密度大于培养基的细胞（绝大部分细胞）通过重力作用会沉降在底面上，这是种自然属性，那么细胞要生存必定得改善这个环境，也是贴壁的主要原因-分泌细胞外基质和粘附因子（ECM&CAM），改善底面的结构，然后很自然就贴附在底面上了。

▲ 原理图

2、细胞贴壁原理及相关因素

大多数的哺乳动物细胞在体内和体外均附着于一定的底物而生长，在体外时这些底物可以是其他细胞、胶原、玻璃或塑料等。

▲ 贴壁过程

3、细胞不贴壁的一些原因

1. 胰酶消化时间把控不当：消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。

2. 缺少贴壁因子：血清中含有促贴壁因子，而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子，细胞的贴壁效果会下降很多。

3. 支原体或细菌的污染。

4. 复苏的细胞本身状态不好，已经老化，失去贴附性。

5. 接种细胞数目太少，无法分泌足够的细胞外基质。

4、如何促进细胞贴壁

1. 适度消化细胞

2. 最好用塑料瓶培养，细胞不易贴壁，建议加多聚赖氨酸处理。

3. 使用合适的细胞外基质或贴壁试剂。

4. 复苏新的细胞，第一周用20%血清帮助细胞复原。

5. 传代接种一定要铺的均匀，避免细胞抱团生长。

6. 细胞传代24小时之内，最好不要晃动，以免影响贴壁。

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