PCR耗材你选对了吗？

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一项用于扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，是在DNA聚合酶和核苷酸底物（dNTP）共同参与下，将目的基因扩增至足够数量，以便进行后续功能分析

在PCR实验中，影响扩增效果的因素有很多，通常有以下几种：

1. 引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度；

2. DNA聚合酶及dNTP的质量和浓度；

3. 温度与时间的设置、循环次数的把控等；

4. 设备及耗材的选择。

实际上，耗材的选择也确实会很大程度上影响实验的结果，而这往往被我们所忽略。因此在选择实验耗材前，我们还需要更深层次的了解PCR耗材相关的特性。

如何选择合适的PCR耗材

A 容量大小

B 容量规格

容量规格常用标准容量（Standard Profile）和低容量（Low Profile）来区分，如下图所示。低容耗材的高度更低，这种短小设计最大程度地减少了反应体系上方的空间（即“死体积”—无用部分），提高热传导效率，降低热循环过程中的蒸发影响。因此，低容管也被称为“快速”管或板。

1、裙边的意义更多在于为自动化，大批量处理提供便利，与机械臂的结合。在常规科研实验室中可能不太需要，使用无裙边板即可。

2、黏性铝膜可能比较少见，尽管不适合qPCR，但对于光敏样品还是合适的耗材，由于其可轻易穿刺，便于PCR中样品转移。

当样品量较少时，实验人员会优先选用单管或者8连管。但是单管或8连管的盖子又怎么选择呢？我们在进行选择时可参考下面的信息。

平盖：可为qPCR提供精确的荧光信号传递；便于书写标记。

凸盖：与PCR仪盖接触，减少压力引起的管变形等；但会影响荧光信号传递，无法应用于qPCR实验。

PCR管和板通常可提供多种不同的颜色形式，以便于对于样品进行视觉区分和鉴别，特别是在高通量实验中。尽管耗材的颜色对DNA扩增没有影响，但在设置实时PCR或qPCR 的反应时，与透明耗材相比，更推荐使用白色耗材，以实现灵敏和准确的荧光检测。

图 1.qPCR使用透明和白色耗材的结果比较（A）与透明孔相比，白色孔Ct值更低（灵敏度更高）。（B）白色孔在技术重复中也表现出更高的一致性。

qPCR的核心数据是Ct值，而荧光信号是Ct值计算的数据来源，所以管内的荧光能否完好地传递至检测器是非常重要的。白色管壁能够阻止荧光穿过管壁和折射（下图A），进而防止荧光传至加热模块（放管子的金属孔壁），被模块吸收或发生不一致反射等情况。相比于透明管，在白管的顶端能够采集到更强，更聚焦的荧光信号（下图B）

图 A 透明管和白管中荧光信号走向；B 分别加入等量荧光素后，荧光强度对比

这里强调一下耗材质量（是否干净）的重要性。PCR耗材必须保证没有污染物和抑制剂。高压和辐射能够去除细菌和DNA酶，但不能去除灰尘和DNA残留，它们可能会抑制PCR反应或产生非特异性扩增。物质是具有吸光度的，即便是很小的污染物也会吸收反应体系中的荧光，影响荧光信号的采集。因此，在生产这些塑料耗材时，从制模到最终的包装都必须在具有颗粒数量限制的设施环境中进行。

图 8联管的一个反应孔中放入杂质，结果扩增结果曲线出现了显著的异常。

// 总结

summary

PCR耗材

封膜板